Prueba de aglutinación en placa para la determinación de Proteína C Reactiva.
SIGNIFICACION CLINICA La Proteína C Reactiva (PCR) es una proteína termolábil que no atraviesa la barrera placentaria y cuya movilidad electroforética se encuentra entre las zonas de las α y β globulinas. Su nombre se debe a la capacidad para precipitar los polisacáridos C de los pneumococos. Es una de las llamadas proteínas de fase aguda y se incrementa en suero, en una gran variedad de enfermedades inflamatorias o como respuesta a necrosis tisular. Su determinación es importante debido a que aumenta rápidamente al comienzo de la enfermedad, 14 a 26 horas luego de la inflamación o injuria tisular y desaparece en la etapa de recuperación, apareciendo sólo durante la fase activa del proceso inflamatorio. La PCR se encuentra comúnmente aumentada en: artritis reumatoidea activa, infecciones virales, tuberculosis, fiebre reumática activa, infarto agudo de miocardio, etc. También se la puede hallar luego de una operación quirúrgica y en gran porcentaje luego de transfusiones sanguíneas. La determinación de PCR no sólo indica la intensidad de la enfermedad sino también la respuesta del paciente a un tratamiento dado. FUNDAMENTOS DEL METODO La PCR se detecta en suero por reacción con un anticuerpo específico adsorbido sobre un soporte inerte de látex. La PCR se une a los anticuerpos adsorbidos produciendo la aglutinación de las partículas de látex. REACTIVOS PROVISTOS Reactivo de Látex: suspensión de partículas de látexpoliestireno sensibilizadas con anticuerpos anti-PCR. Control Negativo: dilución de suero negativo. Control Positivo: dilución de suero positivo. REACTIVOS NO PROVISTOS Solución fisiológica. INSTRUCCIONES PARA SU USO Reactivo de Látex: agitar bien y luego cambiar la tapa ciega por la tapa gotero suministrada adicinalmente. Controles Positivo y Negativo: listos para usar. PRECAUCIONES Los Reactivos Provistos son para uso diagnóstico "in vitro". Los controles han sido ensayados para HIV y HBV, encontrándose no reactivos. No obstante deben ser empleados como si se tratara de material infectiv ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE ALMACENAMIENTO Los Reactivos Provistos son estables en refrigerador (2- 10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No congelar. INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS La autoaglutinación del Reactivo de Látex es indicio de deterioro del mismo. En tal caso desechar. MUESTRA Suero a) Recolección: obtener suero de la manera usual. b) Aditivos: no se requieren. c) Sustancias interferentes conocidas: los sueros marcadamente lipémicos o contaminados pueden dar resultados falsamente positivos. d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: el suero debe ser preferentemente fresco. En caso de no procesarse en el momento puede conservarse hasta 24 horas en refrigerador (2-10oC) y hasta 4 semanas congelado a -20oC. MATERIAL REQUERIDO 1- Provisto - placa de vidrio fondo negro 2- No Provisto - material volumétrico adecuado para efectuar mediciones y diluciones de las muestras - palillos mezcladores descartables - cronómetro - lámpara o fuente de luz PROCEDIMIENTO Llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente antes de usar. Agitar el Reactivo de Látex antes de usar, vaciando previamente la pipeta del gotero. I- TECNICA CUALITATIVA Muestra 1 gota Reactivo de Látex 1 gota Mezclar con un palillo descartable hasta obtener una suspensión uniforme en toda la superficie del círculo. Inmediatamente disparar un cronómetro, balancear suavemente la placa y observar macroscópicamente el resultado bajo un haz luminoso dentro de los 2 minutos. II- TITULACION Los sueros positivos pueden titularse efectuando diluciones seriadas en 8 tubos de Kahn. a) Colocar 0,5 ml de solución fisiológica en cada uno de los tubos. b) Agregar 0,5 ml de suero al tubo Nº 1 y mezclar. Transferir 0,5 ml de esta dilución al tubo Nº 2 y mezclar, continuando así las diluciones hasta el último tubo. Las diluciones así obtenidas equivalen a 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, etc. c) Ensayar cada dilución según la TECNICA I. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Negativo: suspensión homogénea. Positivo: aglutinación que aparece dentro de los 2 minutos. Se califica de 1 a 4 +. Título: inversa de la máxima dilución a la que se produce aglutinación visible macroscópicamente. La concentración aproximada de PCR en la muestra puede ser calculada por la fórmula siguiente: PCR (mg/l) = Título x Sensibilidad de la reacción (6 mg/l) Ejemplo: la muestra presenta un título de 1:2. Su concentración de PCR es de 2 x 6 = 12 mg/l. METODO DE CONTROL DE CALIDAD Procesar simultáneamente el Control Negativo y el Control Positivo provistos, empleando una gota del Control correspondiente en lugar de la muestra. VALORES DE REFERENCIA Hasta 6 mg/l. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA. Tiempos de reacción mayores de dos minutos pueden producir reacciones falsamente positivas por efectos de secado de los reactivos. PERFORMANCE Sensibilidad: PCR-Látex directo detecta 6 mg/l de proteína C reactiva. PRESENTACION Equipo para 50 determinaciones (Cód. 1683152).
